La technique de congélation lente, consiste en une diminution de la température de manière progressive et contrôlée. Généralement, l’embryon est graduellement exposé à des concentrations relativement faibles en cryoprotecteur afin d’obtenir une concentration finale de 1,35-1,5 M ; l’objectif étant de minimiser la toxicité du cryoprotecteur avec un minimum de stress osmotique.



Les paillettes contenant les embryons sont placées dans un congélateur à température ambiante. Ils sont ensuite refroidis à une température légèrement inférieure à 0°C, entre -4°C et -9°C. Dans cet intervalle de température, des cristaux de glaces extra-cellulaires se forment par induction de la cristallisation. Les échantillons sont ensuite soumis à une diminution de température lente, à un rythme de 0,3-0,5°C par minute. Cela résulte en la formation d’un gradient osmotique, entre les milieux intra et extra-cellulaires, ce qui provoque une déshydratation intracellulaire. Cette déshydratation permet la concentration du cryoprotecteur dans les cellules embryonnaires grâce à un phénomène d’équilibre entre les deux milieux. Lorsque la déshydratation cellulaire est suffisante, les paillettes sont plongées dans l’azote liquide. Actuellement, les cryoprotecteurs les plus utilisés sont le glycérol-sucrose et l’éthylène glycol. Le conditionnement des embryons congelés dans des paillettes en plastique est un moyen de stockage sûr et pratique étant donné que les paillettes sont identifiées de manière officielle selon les recommandations de l’IETS.



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SOURCE: www.oie.int



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